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公司新聞
淺談雙鏈聚肌胞檢測
2013-08-30IP屬地 火星156
 

淺談雙鏈聚肌胞檢測

  雙鏈大眾化的檢測方法一般采用熒光增強(qiáng)試驗(yàn)、紫外特征吸收光譜試驗(yàn)和磷測定法、沉降系數(shù)檢查法。這里主要談一下磷測定法檢驗(yàn)雙鏈聚肌胞含量。

  定磷法的原理是:在酸性環(huán)境中,定磷試劑中的鉬酸銨以鉬酸形式與樣品中的磷酸反應(yīng)生成磷鉬酸,當(dāng)有還原劑存在時(shí)磷鉬酸立即轉(zhuǎn)變成藍(lán)色的還原產(chǎn)物—鉬藍(lán)。鉬藍(lán)在660nm的波長處有最大吸收。

   測定供試品中核酸的總磷量,需用***或過氯酸消化成無機(jī)磷后再行測定.供試品中總磷量減去無機(jī)磷量.即得核酸含磷量,出此計(jì)算核酸含量。

   對(duì)照品溶液的制備 精密稱取105℃干燥至恒重的***2.l95g,置500ml量瓶,加水使溶解并稀釋至刻度,搖勻,再精密量取5ml500ml量瓶中,加水至刻庋,搖勻(1ml中含磷l0μg)

   總磷量測定 精密量取供試品溶液1ml.置凱氏燒瓶中,加5mo/L***溶液3.0ml,于l40l60℃消化24小時(shí)。俟溶液呈黃褐色后,放冷,加30%過氧化氫12滴,繼續(xù)消化,直至溶液透明。放冷后,加水0.5ml,水浴加熱10分鐘.放冷,轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中,加水至刻度。精密量取此溶液1ml與對(duì)照品溶液0.8ml.分別加水2.0ml、定磷試劑(6mol /L***—水—2.5%鉬酸破—10%抗血酸1211)3ml,搖勻,45℃加熱25分鐘,立即冷至室溫。照分光光度法(中國藥典2005年版二部附錄ⅣA),在660nm的波長處測定吸收度,計(jì)算。

   無機(jī)磷的測定 精密量取供試品溶液2m}.置離心管中,加沉淀劑(取鋁鉬酸銨1g,加70%過氯酸l4ml、水386ml使溶解)2.0ml,搖勻,以簡每分鐘4000轉(zhuǎn)離心15分鐘,精密量取此溶液1ml,置25ml量瓶中,加水至刻度,搖勻。精密量取此溶液1ml,照總磷量測定項(xiàng)下的方法,自“分別加水2ml”起,依法測定。

   核酸含磷量=總磷量一無機(jī)磷量

上面的這個(gè)就是檢測雙鏈聚肌胞含量的方法--磷測定法,這種方法本身是沒有任何問題的,可是如果拿它作為檢驗(yàn)雙鏈聚肌胞含量的唯一方法,我們認(rèn)為是很不妥的。磷確實(shí)是雙鏈聚肌胞的組成部分,但是磷的增加可以有很多途徑,有很多的方面可以影響到檢測,所以檢驗(yàn)雙鏈聚肌胞時(shí)要綜合考慮各種系數(shù)并做好統(tǒng)計(jì),最后得出客觀結(jié)論。

 

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