HEPES（4-羥乙基哌嗪乙磺酸）是一種氫離子緩沖劑，pH值緩沖范圍：6.8-8.2。我們在細胞培養過程中，經常少不了HEPES緩沖液。它是一種弱酸，在開放式的培養條件中，若加入HEPES，可防止培養基內pH氧化升高，從而將PH維持在7.0左右，下面我們繼續看看HEPES在細胞培養中的應用。

1.HEPES在低溫時可較好地保持酶的結構和功能

HEPES緩沖液是一種弱酸，常作為有機化工中的兩性離子緩沖劑和醫藥中間體。該物質的分解能力可隨溫度的升高而增強，隨溫度的降低而減弱，但與其他緩沖劑相比，它的分解常數隨溫度變化不大，這使HEPES緩沖液成為在低溫時可較好地保持酶的結構和功能的緩沖劑。

2.HEPES PH值范疇有益于細胞培養

通常，大多數細胞的最佳培養環境是pH7.2-pH7.4，而Hepes的緩沖范圍剛好為pH6.8-pH8.2內。這對細胞培養是有益的，與其他緩沖劑相比，Hepes在維持細胞培養基的pH值方面具有更高的穩定性，這也是Hepes廣泛用于細胞培養，組織培養，蛋白質純化和提取，免疫沉淀，細胞裂解，活細胞成像和其他生物/生化研究的原因。

3.HEPES有益于肺炎支原體培養

 HEPES 是常用細胞培養緩沖劑，使用終濃度一般為10～50 mmol/L，通常情況下培養液內含20 mmol/L HEPES 即可起到緩沖作用，細胞培養常用濃度為10 mmol/L。HEPES 緩沖液在此過程中發揮了緩沖作用，且濃度越大緩沖效果越明顯。當培養基 pH 在 6.8 左右時，培養的肺炎支原體進入了對數生長中后期；培養基PH在 6.5～6.0之間，培養基中的肺炎支原體含量達到平臺期，菌量維持在很大水平。

4.大腸桿菌培養基中建議使用HEPES

大腸桿菌培養基中比較常用的Buffer system是碳酸氫鹽，它可提供營養，但卻在生理PH值條件下會降低緩沖能力。而HEPES是一種很強的Buffer，加入HEPES能使細胞培養基在PH7.2-7.6條件下緩沖能力增強。Hepes的貯存液濃度一般為1M，常溫保存。培養基中的終濃度為25mM，即5ml 1M的Hepes加入到200ml完全培養基中。

培養細胞的重要環節有很多，其中很重要的一步就是為細胞選擇適合的生長環境，選擇高品質的培養基，對于細胞培養而言，不僅可以確保您實驗數據的穩定性和可重復性，更能節約寶貴的實驗時間和精力。德晟生產的HEPES為白色晶體粉末，主含量≥99.50%，鐵離子≤5ppm，***鹽≤0.05%，重金屬殘留（Pb)≤10ppm。可提供試用樣品粉末，自行配置成溶液進行檢測使用。