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江蘇化學試劑檢測南京艾康全心化工品檢測

 
 
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更新 2024-04-15 17:19
 

南京艾康全心分析檢測有限公司

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色譜雙峰指的是明明是同一種物質,但在色譜圖中卻呈現雙峰,讓實驗人員誤認為含有兩種物質。那么,出現雙峰的原因主要有哪些呢?今天小析姐就和大家聊一聊,液相色譜出現“雙峰”的原因。
在HPLC分析中,在色譜柱正常,樣品濃度適宜,分析方法合適,色譜峰在出峰時間較短的條件下,峰型應對稱而尖銳。但在實際操作中,如果對樣品不了解,前處理不恰當或者分析方法不合理等,會出現峰形不正常的情況,其中雙峰現象就是液相色譜中常見的問題之一。
出現色譜雙峰的原因一般有以下幾種:
色譜柱
 
如果在樣品分析時發現每個色譜峰都有雙峰出現,尤其在采用單一純物質時,則可以確定是色譜柱出現問題了,一般是柱頭受損或者柱頭固定相污染引起的。
如果進樣量少,原來色譜柱正常,色譜峰的形狀多為一大峰帶一小峰,不一定拖尾,這一般應是柱頭受堵,將色譜柱反過來接,用流動相沖洗或酸洗或其它溶劑,將堵在柱頭的殘留物沖掉,再反過來,一般情況下就行了。當然不反沖,正沖有時也會正常的。如果峰拖尾,雙峰強弱相差不大,柱頭固定相變臟或流失可能性更大,這時可以將進樣頭擰開,將微孔濾片超聲,柱頭刮去一部分填料,重新填上新填料擰緊,不過這個對技術要求較高且不能經常做,否則用不了幾次,色譜柱就會應柱效降低而報廢。如果上述不能解決問題,可能是柱塌陷造成的,此時需要更換色譜柱。

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溶劑問題
 
目前HPLC分析多為反相色譜,流動相多為甲chun、乙jing、水,加各種添加劑以改善分離性能。樣品一般用與流動相相溶的溶劑溶解,最佳的溶解方法是用流動相溶解。在實際分析中,有時候為了樣品的溶解性或穩定性加入了一點的緩沖液,緩沖液的酸堿性可能會導致樣品轉化,從而產生雙峰現象。此時需要更換緩沖液,調整溶劑pH值,或者用流動相配置樣品。
此外,樣品要現配現用,避免樣品溶解液的有機相比例、pH值發生變化而導致的溶劑效應。
進樣量
 
當用溶劑極性強度大的試ji,如純甲chun、純乙jing,純乙chun,而分析體系中以水為主時,如果樣品進樣量大,如定量管為20ul,此時單一的純物質會出現雙峰,第二峰比第一峰小(每次都不太一樣),且拖尾,保留時間會提前(相對進樣量少而言),將進樣量減少一半以上,峰型將變為正常。這是樣品的溶劑與流動相極性相差太大,而流動相來不及將其稀釋達到平衡造成的,此情況下需要減少進樣量。
另一個原因是,進樣量不一定大,但絕對量很大,色譜圖上的雙峰緊靠在一起,基本上齊高,不拖尾(如果出峰很快,也可能是色譜柱問題)。將樣品稀釋再進樣就可以了,這是由于進樣量過大,色譜柱過載造成的。
 
 
樣品特性
 
有些樣品由于其化學結構的特點,存在互變異構現象,而這種互變異構體無法分開,而是以一個動態平衡存在。在色譜分析時,在一個特定的條件下(如pH值、流動相極性、溫度等),一種物質將出現雙峰,雙峰靠的很近,基本齊高,不拖尾,條件稍一變化,尤其pH,雙峰現象將消失,如紅霉素等。
有的樣品紫外的色譜圖上看不到雙峰,但在LC-MS下,用質譜檢測器,其質譜的總離子流圖上較明顯,如農藥啶蟲瞇(吡蟲清)。
pH值
 
體系pH值對色譜雙峰的影響出現在各個環節上(前面已經提到),尤其在緩沖液流動相平衡過程中其影響更為明顯。當連續進樣時,受pH的連續變化影響會經常遇到這種雙峰的情況。另外,在樣品分析時,流動相的pH盡量遠離被分析物的等電點,否則也容易引起雙峰的產生。在用離子對試ji分析時,選擇不好條件也會容易引起雙峰的產生。
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